【題目】λ噬菌體有極強(qiáng)的侵染能力,能在細(xì)菌中快速進(jìn)行DNA復(fù)制,產(chǎn)生子代噬菌體,最終導(dǎo)致細(xì)菌破裂(稱為溶菌狀態(tài));或者整合到細(xì)菌基因組中潛伏起來,不產(chǎn)生子代噬菌體(稱為溶原狀態(tài))。在轉(zhuǎn)基因技術(shù)中常用λ噬菌體構(gòu)建基因克隆載體,使其在受體細(xì)菌中大量擴(kuò)增外源DNA,以備研究使用。相關(guān)操作如下圖所示,請回答:

(1)在構(gòu)建基因克隆載體時,可被噬菌體蛋白質(zhì)包裝的DNA長度約為36~51kb,則經(jīng)人工改造的λgtl0載體可插入的外源DNA的最大長度為______kb。為獲得較大的插入能力,可刪除λ噬菌體DNA組成中的______序列以縮短其長度。

(2)構(gòu)建基因克隆載體時,需用到的酶是______。λ噬菌體DNA上通常沒有適合的標(biāo)記基因,因此人工改造時需加裝適合的標(biāo)記基因,如下圖λgtl0載體中的imm434基因,該基因編碼一種阻止λ噬菌體進(jìn)入溶菌狀態(tài)的阻遏物。外源DNA的插入位置應(yīng)位于imm434基因______(之中/之外),使經(jīng)侵染培養(yǎng)后的受體菌處于______狀態(tài),表明已成功導(dǎo)入目的基因。

(3)合成噬菌體所需的小分子原料主要是_____________。分離純化噬菌體重組DNA時,將經(jīng)培養(yǎng)10小時左右的大腸桿菌=噬菌體的培養(yǎng)液超速離心,從______________(上清液、沉淀物)獲得噬菌體。

【答案】 7.6kb 中部 限制酶和DNA連接酶 之中 溶菌 氨基酸和脫氧核苷酸 上清液

【解析】(1)在構(gòu)建基因克隆載體時,可被噬菌體蛋白質(zhì)包裝的DNA長度約為36~51kb,經(jīng)人工改造的λgtl0載體的DNA長度為43.4kb,則可插入的外源DNA的最大長度為7.6kb。為獲得較大的插入能力,可刪除λ噬菌體DNA組成中的中部序列(控制溶原生長)以縮短其長度。

(2)構(gòu)建基因克隆載體時,需用到的酶是限制酶和DNA連接酶。由于imm434基因編碼一種阻止λ噬菌體進(jìn)入溶菌狀態(tài)的阻遏物,因此外源DNA的插入位置應(yīng)位于imm434基因之中,可以破壞imm434基因,使λ噬菌體能進(jìn)入溶菌狀態(tài),使經(jīng)侵染培養(yǎng)后的受體菌處于溶菌狀態(tài),表明已成功導(dǎo)入目的基因。

(3)噬菌體主要由蛋白質(zhì)和DNA組成,則合成噬菌體所需的小分子原料主要是氨基酸和脫氧核苷酸。分離純化噬菌體重組DNA時,將經(jīng)培養(yǎng)10小時左右的大腸桿菌與噬菌體的培養(yǎng)液超速離心,從上清液獲得噬菌體。

練習(xí)冊系列答案
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AYYRR×YYRr BYYRr×YyRr

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A. 右側(cè)液面高度下降;胰島素 B. 右側(cè)液面高度下降;蔗糖酶

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B. 滲透平衡時S1濃度大于S2

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