Question

【題目】人乳鐵蛋白是一種重要的藥用保健蛋白．如圖表示利用乳腺生物反應器生產(chǎn)人乳鐵蛋白的過程，圖中Tetr表示四環(huán)素抗性基因，Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，五種限制酶的識別序列及切割位點如表所示，請回答以下問題：

限制酶	BamHⅠ	HaeⅢ	BclⅠ	Sau3AⅠ	NotⅠ
識別序列 及切割位點

（1）①過程常采用的方法是 ．
（2）構建基因表達載體時，需要將人乳鐵蛋白基因嵌入到啟動子和之間，這樣人乳鐵蛋白基因就能在乳腺細胞中表達．
（3）要將人乳鐵蛋白基因插入質粒，若只允許使用一種限制酶，應選擇的限制酶是 ．
（4）據(jù)圖分析，篩選含有重組質粒的受體細胞首先需要在含（填“四環(huán)素”或“氨芐青霉素”或“四環(huán)素或氨芐青霉素”）的培養(yǎng)基上進行，原因是 ．
（5）若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接起來，連接部位的6個堿基對序列為 ， 對于該部位，這兩種酶（“都不能”或“只有一種能”）切開．

Answer 1

【答案】
（1）顯微注射法
（2）終止子
（3）Sau3AⅠ
（4）氨芐青霉素；用限制酶切割后破壞了Tetr基因，但不會破壞Ampr基因，導入重組質粒的受體細胞（對氨芐青霉素具有抗性），能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來
（5）；都不能
【解析】解：（1）將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法．（2）構建基因表達載體時，需要將人乳鐵蛋白基因嵌入到啟動子和終止子之間，這樣人乳鐵蛋白基因就能在乳腺細胞中表達．（3）根據(jù)表中五種酶的識別序列及切割位點可知，限制酶Sau3AI還可以切割限制酶BstⅠ和限制酶BamHⅠ的識別序列，因此要將人乳蛋白基因插入載體，在只允許用一種限制酶酶切載體和人乳鐵蛋白基因的情況下，應選擇限制酶Sau3AI．（4）據(jù)用限制酶Sau3AI切割后會破壞四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此倒入重組質粒的受體細胞可能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來．（5）根據(jù)表格中各種限制酶的識別序列和切割位點可知，若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接起來，連接部位的6個堿基對序列為 ，對于該部位，這兩種酶都不能切開． 所以答案是：（1）顯微注射法（2）終止子（3）Sau3AⅠ（4）氨芐青霉素 用限制酶切割后破壞了Tetr基因，但不會破壞Ampr基因，導入重組質粒的受體細胞（對氨芐青霉素具有抗性），能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來（5） 都不能
【考點精析】掌握基因工程的原理及技術是解答本題的根本，需要知道基因工程的原理是利用DNA重組技術．