Question

【題目】通過設計引物，運用PCR技術可以實現(xiàn)目的基因的定點誘變。如圖為基因工程中獲取突變基因的過程，其中引物1序列中含有一個堿基T不能與目的基因片段配對，但不影響引物與模板鏈的整體配對，反應體系中引物1和引物2的5'端分別設計增加限制酶a和限制酶b的識別位點。有關敘述不正確的是（　�。�

A. 引物中設計兩種限制酶識別位點有利于目的基因定向插入

B. 在PCR反應體系中還需要加入4種游離核苷酸、Taq酶等

C. 第3輪PCR，引物1能與圖中②結合并且形成兩條鏈等長的突變基因

D. 第3輪PCR結束后，含突變堿基對且兩條鏈等長的DNA占1/2

Answer 1

【答案】D

【解析】

PCR的原理是DNA雙鏈復制，步驟包括高溫變性、復性、延伸。該過程需要耐高溫的DNA聚合酶催化，需要四種游離的脫氧核苷酸做原料。根據(jù)圖中可得，由于引物的一個堿基在不影響與模板鏈整體配對的前提下不與目的基因配對，再利用PCR技術實現(xiàn)了目的基因的定點誘變。其技術原理是堿基互補配對原則。

引物中設計兩種限制酶識別位點，可以配合載體的限制酶識別位點，幫助目的基因定向定點插入運載體，避免發(fā)生自身環(huán)化，A正確；PCR反應體系中需要加入引物、4種游離的核苷酸、Taq酶，直接利用高溫解旋，B正確；第3輪PCR中，物質②是引物2以引物1拓展得到的DNA鏈為模板進行復制得到的，故引物1能與圖中②結合并且形成兩條鏈等長的突變基因，C正確；第3輪PCR結束后，含突變堿基對且兩條鏈等長的DNA只有1個，而子代DNA有23=8個，故含突變堿基對且兩條鏈等長的DNA占1/8，D錯誤。因此，本題答案選D。