Question

【題目】人組織纖溶酶原激活物（htPA）是一種重要的藥用蛋白，可在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中獲得。流程：

下圖1和2中分別是構(gòu)建重組質(zhì)粒的質(zhì)粒和目的基因，其上標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，其中切割位點(diǎn)相同的酶不重復(fù)標(biāo)注。下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點(diǎn)。

請回答下列問題：

⑴質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有______、_______（答出兩點(diǎn)即可）。

⑵用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用__________兩種限制酶切割，選擇不同限制酶切割的目的是________________。

⑶DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有________和________。

⑷為獲取更多的卵（母）細(xì)胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其__________。采集的精子需要經(jīng)過__________，才具備受精能力。

⑸將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵常用的方法是__________。為了獲得母羊，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行__________。

⑹從受精卵到早期胚胎過程中所用的胚胎工程技術(shù)是_________。在胚胎移植前，通過_______技術(shù)可獲得較多胚胎。

⑺若在轉(zhuǎn)ht-PA基因母羊的羊乳中檢測到__________，說明目的基因成功表達(dá)。

Answer 1

【答案】能自我復(fù)制 具有標(biāo)記基因 Bcl I和Hind Ⅲ 避免質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化和隨意連接 E．coliDNA連接酶 T4DNA連接酶 超數(shù)排卵 獲能（處理） 顯微注射法 性別鑒定 （早期）胚胎培養(yǎng) 胚胎分割 htPA（或人組織纖溶酶原激活物）

【解析】

基因工程的操作步驟：獲取目的基因；構(gòu)建基因表達(dá)載體；把目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；目的基因的檢測和鑒定。

胚胎移植指將雌性動物體內(nèi)的早期胚胎，或者通過體外受精及其他方式得到的胚胎，移植到生理狀態(tài)相同的其他雌性動物的體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。

（1）質(zhì)粒作為載體，要求具備能夠自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因等特點(diǎn)。

（2）用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，不能選擇BamHⅠ和Sau3AⅠ進(jìn)行切割，會破壞質(zhì)粒上的2個(gè)標(biāo)記基因；故應(yīng)選用Bcl I和Hind Ⅲ兩種限制酶切割；用不同限制酶切割產(chǎn)生不同的黏性末端，可以避免質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化和隨意連接。

（3）常見的DNA連接酶有E．coliDNA連接酶和T4DNA連接酶。

（4）對供體母羊注射促性腺激素，使其超數(shù)排卵，以獲取更多的卵（母）細(xì)胞。采集的精子需要經(jīng)過獲能處理，才具備受精能力。

（5）常用顯微注射法將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵。為了獲得母羊，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行性別鑒定，選擇雌性。

（6）體外受精后，需要采用早期胚胎培養(yǎng)獲得早期胚胎。在胚胎移植前，可以通過胚胎分割可獲得較多胚胎，需要注意將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分割均勻。

（7）要檢測是否目的基因成功表達(dá)，可以采用抗原抗體雜交法，若出現(xiàn)雜交帶，在轉(zhuǎn)ht-PA基因母羊的羊乳中檢測到htPA，說明目的基因成功表達(dá)。