Question

【題目】（一）純化分離細菌的一般步驟如下圖所示：

（1）若分離以尿素為氮源的菌種，培養(yǎng)基中通常加入的凝固劑是_____，用于尿素溶液滅菌的工具是_____。若要對分離的菌種進行計數(shù)，步驟X是______方法。

（2）若分離醋化醋桿菌得到如圖所示的結果，那么步驟X需在_____條件下，用______(工具)完成接種。

（3）為了增加純化分離的醋化醋桿數(shù)量，需要對其進行______，獲得的菌種可用于制作果醋，將菌種以_______法固定在木屑上，有利于醋酸發(fā)酵的進行。

（二）細胞內(nèi)核苷酸的形成途徑有兩種。途徑1：利用磷酸、核糖、氨基酸、CO2和NH3等化合物合成。途徑2：利用次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成。氨基蝶呤可阻斷途徑1。正常的脾細胞核苷酸合成的兩條途徑都存在，但在培養(yǎng)基中僅存活5~7天，實驗所用的骨髓瘤細胞是途徑2缺陷型細胞。請回答：

（1）用于制備單克隆抗體的脾細胞是從經(jīng)過______的小鼠體內(nèi)獲得，與篩選出的小鼠骨髓瘤細胞用______處理誘導融合。

（2）經(jīng)誘導后，考慮細胞兩兩融合有3種類型，為了篩選出雜交瘤細胞，需在培養(yǎng)基中加入的特殊物質(zhì)有____，然后培養(yǎng)____天以上，從而達到篩選目的。篩選出的雜交瘤細胞具有_____特點。

（3）篩選出陽性雜交瘤細胞進行兩次克隆培養(yǎng)，為提高細胞克隆的形成率，應在培養(yǎng)中加入用射線照射失去_____能力的小鼠成纖維細胞以支持生長。

（4）克隆形成的符合要求的雜交瘤細胞，在小鼠體內(nèi)或體外培養(yǎng)，可獲得抗體。經(jīng)純化后的抗體應在 _____條件下保存，使其較長時間內(nèi)保持活性。

Answer 1

【答案】瓊脂糖 G6玻璃砂漏斗 涂布分離 無菌 接種環(huán) 擴大培養(yǎng) 吸附 免疫 （滅活的）仙臺病毒或聚乙二醇或低壓交流電場 次黃嘌呤、胸腺嘧啶核苷、氨基蝶呤 7 既能無限增殖又能產(chǎn)生抗體 增殖 4℃或低溫

【解析】

培養(yǎng)基按物理性質(zhì)分可分固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基中加入凝固劑可以制成固體培養(yǎng)基，常用的凝固劑是瓊脂或瓊脂糖，分離以尿素為唯一氮源的微生物時應以瓊脂糖為凝固劑，因為瓊脂是混合物，含有N。微生物常用接種方法有平板劃線法和稀釋涂布分離法，其中平板劃線法更易獲得單菌落，稀釋涂布分離法適合用于微生物計數(shù)。動物細胞融合的主要應用是制備單克隆抗體，單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞。正常的脾細胞核苷酸合成的兩條途徑都存在但不能無限增殖，僅存活5~7天，且途徑1可被氨基蝶呤阻斷，骨髓瘤細胞是途徑2缺陷型細胞即能利用次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核苷酸，在特定培養(yǎng)基上要選擇保留雜交瘤細胞，則培養(yǎng)基中要加入次黃嘌呤、胸腺嘧啶核苷、氨基蝶呤，以阻斷途徑1，據(jù)此分析。

（一）（1）若分離以尿素為氮源的菌種，應配置以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中通常加入的凝固劑是瓊脂糖，用于尿素溶液滅菌的工具是G6玻璃砂漏斗。若要對分離的菌種進行計數(shù)，步驟X是稀釋涂布分離法。

（2）若分離醋化醋桿菌得到如右圖所示的結果，那么步驟X需在無菌條件下，用接種環(huán)完成接種。

（3）為了增加純化分離的醋化醋桿數(shù)量，需要對其進行擴大培養(yǎng)，獲得的菌種可用于制作果醋，將菌種以吸附法固定在木屑上，有利于醋酸發(fā)酵的進行。

（二）（1）用于制備單克隆抗體的脾細胞是從經(jīng)過免疫的小鼠體內(nèi)獲得，與篩選出的小鼠骨髓瘤細胞用（滅活的）仙臺病毒或聚乙二醇或電刺激處理誘導融合。

（2）經(jīng)誘導后，考慮細胞兩兩融合有3種類型，為了篩選出雜交瘤細胞，需在培養(yǎng)基中加入的特殊物質(zhì)有次黃嘌呤、胸腺嘧啶核苷、氨基蝶呤，然后培養(yǎng)7天以上，從而達到篩選目的。篩選出的雜交瘤細胞具有既能無限增殖又能產(chǎn)生抗體特點。

（3）篩選出陽性雜交瘤細胞進行兩次克隆培養(yǎng)，為提高細胞克隆的形成率，應在培養(yǎng)中加入用射線照射失去增殖能力的小鼠成纖維細胞以支持生長。

（4）克隆形成的符合要求的雜交瘤細胞，在小鼠體內(nèi)或體外培養(yǎng)，可獲得抗體。經(jīng)純化后的抗體應在4℃或低溫條件下保存，使其較長時間內(nèi)保持活性。