Question

【題目】回答下列（一）（二）小題：

（一）為了尋找修復(fù)多環(huán)芳烴污染后土壤的真菌品種，有關(guān)研究如下：已知某些真菌品種分泌的漆酶可以氧化多種多環(huán)芳烴有機污染物，而且可以氧化愈創(chuàng)木酚產(chǎn)生紅棕色物質(zhì)。從土壤中篩選分泌漆酶的真菌菌株流程如圖1，選擇F-5進行多環(huán)芳烴嚴重污染土壤修復(fù)研究，共設(shè)四個處理，每個處理三個重復(fù)，多環(huán)芳烴的降解情況如圖2所示。分析并回答下列問題：

圖1 篩選分泌漆酶的高表達真菌菌株

注：AS：將5mLF-5菌株培養(yǎng)物勻漿與5g玉米粉混勻，加入土壤中

A：將5mLF-5菌株培養(yǎng)物勻漿加入土壤中

S：將5g玉米粉加入土壤中

CK：土壤中不加營養(yǎng)物質(zhì)和微生物勻漿

圖2多環(huán)芳烴降解情祝的柱形圖

（1）圖1將土壤懸浮液進行梯度稀釋時應(yīng)用__________水，①②培養(yǎng)基按物理性質(zhì)分屬于__________，對接種環(huán)滅菌的方法是___________。涂布到培養(yǎng)基上的菌懸液不宜過多的原因是___________。

（2）①中挑取的單菌落應(yīng)有何特征____________________，為什么又要將菌株接種于不含愈創(chuàng)木酚的②培養(yǎng)基上培養(yǎng)______________________________。

（3）分析圖2可知：AS和A兩種處理的降解率明顯高于CK和S兩組，而AS和A之間差異不顯著，這表明土壤多環(huán)芳烴降解的主要原因是_____________________。此外推測S組的降解率顯著高于CK的原因是供試土壤為長期污染的土壤，其中可能含有______________________，通過添加營養(yǎng)物質(zhì)可以在一定程度上刺激并強化其功能。

（二）某中國科研團隊通過體細胞核移植成功克隆獼猴“中中”和“華華”，打破了體細胞克隆非人靈長類動物的理想是不可能實現(xiàn)的觀點。實驗流程如圖所示，分析并回答下列問題：

（1）供體體細胞在體外培養(yǎng)時，定期更換培養(yǎng)液的目是____________。由于人們對動物細胞所需營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全弄清楚，因此在培養(yǎng)細胞時需在培養(yǎng)基中加入______________。

（2）體細胞核移植時，將甲的細胞核移植到乙的去核卵母細胞中，選擇卵母細胞的原因是_____________；圖中④表示______________技術(shù)。

（3）克隆猴“中中”和“華華”核基因組理論上與_____________（填“甲”“乙”或“丙”）猴一致，科研人員通過27個微衛(wèi)星位點分析證明克隆猴核基因組信息與理論上一致，微衛(wèi)星序列是1-4個堿基的重復(fù)序列，不同個體間重復(fù)次數(shù)往往不同，說明微衛(wèi)星位點_____________（填“容易”或“不容易”）發(fā)生變異，選用多個微衛(wèi)星位點而非個別微衛(wèi)星位點的優(yōu)點是______________；“中中”和“華華”的有些性狀與核基因組供體并不完全相同，除環(huán)境因素外，發(fā)生此現(xiàn)象的原因是___________________________。

Answer 1

【答案】無菌水 固體培養(yǎng)基 灼燒滅菌 防止菌體堆積得不到由單個真菌形成的菌落 菌落周圍有紅棕色氧化圈 確認顏色變化是否為菌落本身的顏色而非分泌漆酶所致 接種真菌F-5 具有一定降解功能的土壤微生物 防止代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害 動物血清或血漿 卵母細胞的質(zhì)中含有能使已分化的核表達出全能性的營養(yǎng)和物質(zhì) 胚胎移植 甲 容易 減小誤差，提高實驗數(shù)據(jù)的準確性 卵母細胞的細胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會對克隆動物的性狀產(chǎn)生影響

【解析】

微生物篩選培養(yǎng)的過程：

①取樣：在微生物富集的環(huán)境中取樣，如：想培養(yǎng)分解硝基苯酚的細菌，應(yīng)在硝基苯酚含量較高的環(huán)境中進行取樣。

②選擇培養(yǎng)：利用選擇培養(yǎng)基（含有特定氮源或碳源），保證要分離微生物生長但是抑制其他微生物生長。

③分離純化：可以利用稀釋涂布平板法或平板劃線法將選擇培養(yǎng)后的微生物接種培養(yǎng)，篩選鑒定，確定目標菌落，然后接種特定菌落微生物進行純化培養(yǎng)。

培養(yǎng)基的成分：一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣等的要求。

動物細胞培養(yǎng)：在動物細胞的培養(yǎng)液中需加入有機鹽、無機鹽、維生素、激素、氨基酸、核苷酸及血清（兩鹽、兩素、兩酸、一血清），以保證細胞的正常生命活動。

胚胎移植：一般將胚胎培養(yǎng)到桑葚胚或囊胚時期即可進行移植，在移植之前可以進行胚胎性別鑒定確定胚胎性別，也可以進行胚胎分割，增加胚胎數(shù)目，但是注意在分割時需要將胚胎的內(nèi)細胞團均等分割，保證分割后胚胎發(fā)育正常。

（一）（1）將土壤懸浮液進行梯度稀釋時應(yīng)用無菌水，以防止樣品被雜菌污染。①②培養(yǎng)基都可長出菌落，所以按物理性質(zhì)分屬于固體培養(yǎng)基。對接種環(huán)滅菌的方法是灼燒滅菌。涂布到培養(yǎng)基上的菌懸液過多易造成防止菌體堆積得不到由單個真菌形成的菌落。

（2）①中挑取的單菌落應(yīng)是能夠分泌漆酶的品種，培養(yǎng)基中含有愈創(chuàng)木酚，若菌體可以分泌漆酶，則菌落周圍會有紅棕色氧化圈出現(xiàn)。有些菌種可直接分泌紅棕色物質(zhì)，所以在不含愈創(chuàng)木酚的培養(yǎng)基上再接種一次，確定培養(yǎng)基顏色變化為菌落本身的顏色還是分泌漆酶所導(dǎo)致的顏色變化。

（3）分析圖2可知：AS和A兩種處理的降解率明顯高于CK和S兩組，而AS和A之間差異不顯著，AS和A均加入了5mL的F-5菌株培養(yǎng)物，而CK和S兩組未加，所以土壤多環(huán)芳烴降解的主要原因是接種真菌F-5。供試土壤為長期污染的土壤，其中可能含有具有一定降解功能的土壤微生物，S組較CK組多加入了玉米粉，所以S組的降解率顯著高于CK的原因可能為：添加營養(yǎng)物質(zhì)可以在一定程度上刺激并強化土壤微生物的功能。

（二）（1）動物細胞體外培養(yǎng)需要定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害，由于人們對動物細胞所需營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全弄清楚，因此在培養(yǎng)細胞時需在培養(yǎng)基中加入動物血清或血漿。

（2）由于卵母細胞的質(zhì)中含有能使已分化的核表達出全能性的營養(yǎng)和物質(zhì),所以體細胞核移植時一般將細胞核移植到去核卵母細胞中。圖中④表示將克隆胚胎移入代孕個體丙，所以表示胚胎移植技術(shù)。

（3）克隆個體的基因型與核供體相同，所以克隆猴“中中”和“華華”核基因組理論上與甲一致。微衛(wèi)星序列是1-4個堿基的重復(fù)序列，不同個體間重復(fù)次數(shù)往往不同，說明微衛(wèi)星位點的堿基序列容易重復(fù)或缺失，因此微衛(wèi)星位點容易發(fā)生變異，選用多個微衛(wèi)星位點而非個別微衛(wèi)星位點可以防止個別位點突變造成檢測誤差，因此選用多個微衛(wèi)星位點的目的是減小誤差，提高實驗數(shù)據(jù)的準確性。性狀由基因與環(huán)境相互作用控制，基因包括核基因和質(zhì)基因，所以“中中”和“華華”的有些性狀與核基因組供體并不完全相同，除環(huán)境因素外，就是受卵母細胞的細胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)的影響。