Question

【題目】某質(zhì)粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制酶切割位點(diǎn)，同時(shí)還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因。利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過程如圖所示，請(qǐng)回答下列問題：

（1）從基因文庫(kù)中獲得的抗鹽基因可用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，將__________、__________、四種游離的脫氧核苷酸、Taq酶投入儀器中DNA分子可以進(jìn)行指數(shù)擴(kuò)增。

（2）在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用圖中__________兩種限制酶，目的是：_____________。

（3）將目的基因?qū)�入煙草常�?/span>__________法，該方法是利用了農(nóng)桿菌___________特點(diǎn)。

（4）為了確定抗鹽煙草培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的_____________作探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)，又要用____________________的方法從個(gè)體水平鑒定煙草植株的耐鹽性。

Answer 1

【答案】模板DNA 引物 SalI，HindIII 以保證重組DNA序列的唯一性 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 Ti質(zhì)粒的T-DNA可轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上 目的基因（抗鹽基因） 一定濃度的鹽水澆灌煙草植株

【解析】

根據(jù)題意和圖示分析可知：質(zhì)粒和含抗鹽基因的DNA片段上均有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制性核酸內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)；

在質(zhì)粒上，這三種限制酶的切割位點(diǎn)都位于抗四環(huán)素基因上，用其任何一種酶都會(huì)破壞四環(huán)素抗性基因；在含抗鹽基因的DNA片段上，BamHⅠ位于目的基因上，用BamHⅠ切割會(huì)破壞目的基因。

（1）PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增需要將模板DNA、引物、四種游離的脫氧核苷酸、Taq酶投入儀器中DNA分子可以進(jìn)行指數(shù)擴(kuò)增。

（2）質(zhì)粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalI、Hindm、BamHI三種限制酶切割位點(diǎn)，其中BamHI的切割位點(diǎn)位于目的基因上，用該酶切割會(huì)破壞目的基因；若只用SalI一種限制酶切割可能會(huì)導(dǎo)致目的基因與運(yùn)載體反向連接；因此在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用SalI和HindIII兩種限制酶對(duì)質(zhì)粒和抗鹽基因進(jìn)行切割，以保證重組DNA序列的唯一性。

（3）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，利用了農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒的T-DNA可轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上特點(diǎn)。

（4）探針是指用放射性同位素標(biāo)記的目的基因（抗鹽基因），除了從分子水平上進(jìn)行檢測(cè)，還可以從個(gè)體水平上進(jìn)行鑒定，即用一定濃度的鹽水澆灌煙草植株來鑒定煙草的耐鹽性。