Question

【題目】如圖為某種質(zhì)粒表達(dá)載體簡(jiǎn)圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ、Bam HⅠ的酶切位點(diǎn)，ampR為青霉素抗性基因，tetR為四環(huán)素抗性基因，P為啟動(dòng)子，T為終止子，ori為復(fù)制原點(diǎn)。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRⅠ、Bam HⅠ在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。據(jù)圖回答：
（1）將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒表達(dá)載體分別用EcoRI酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進(jìn)行連接后，其中由兩個(gè)DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有、、三種。
（2）用上述3種連接產(chǎn)物與無(wú)任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。之后將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是。

Answer 1

【答案】
（1）目的基因—載體連接物；載體—載體連接物；目的基因—目的基因連接物
（2）載體—載體連接物；目的基因—載體連接物、載體—載體連接物
【解析】（1）用EcoRI酶切出的目的基因和質(zhì)粒具有相同的黏性末端，如果放在一起加入DNA連接酶，則可出現(xiàn)三種連接結(jié)果，即會(huì)出現(xiàn)目的基因自身形成的連接物，載體自身形成的連接物和重組質(zhì)粒。（2）載體自身形成的連接物能重新形成完整的tetR基因，具有抗四環(huán)素的特點(diǎn)，其他連接物中tetR基因被限制性內(nèi)切酶破壞，不再具有抗四環(huán)素的特點(diǎn)；在整個(gè)操作過程中，ampR基因保持完整，質(zhì)粒自身形成的連接物和重組質(zhì)粒都具有抗青霉素的特性。
【考點(diǎn)精析】根據(jù)題目的已知條件，利用基因工程的原理及技術(shù)的相關(guān)知識(shí)可以得到問題的答案，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．