Question

【題目】基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心。圖1為限制酶EcoRⅠ的識別序列，圖2表示目的基因及限制酶切點(diǎn)，圖3表示質(zhì)粒。回答下列問題：

（1）用圖1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其特異性而言，切開的是_________之間相連的化學(xué)鍵，該化學(xué)鍵為_________。

（2）采用PCR擴(kuò)增目的基因的原理是_________。圖2中A、B、C、D4種單鏈DNA片段中，有_________兩種引物（DNA復(fù)制子鏈的延伸方向5′→3′）。

（3）在構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時(shí)，用PstⅠ、EcoRⅠ兩種酶同時(shí)切割目的基因和質(zhì)粒，是為了防止一種酶切割時(shí)造成_________。不選用限制酶PstⅠ和HindⅢ同時(shí)對質(zhì)粒和目的基因進(jìn)行切割的原因是_________。

（4）目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為_________；要檢測轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因，經(jīng)常采用的檢測方法是_________技術(shù)。

Answer 1

【答案】鳥嘌呤脫氧核苷酸和腺嘌呤脫氧核苷酸 磷酸二酯鍵 DNA復(fù)制 B、C 目的基因與運(yùn)載體反向連接 會破壞標(biāo)記基因 轉(zhuǎn)化 DNA分子雜交

【解析】

據(jù)圖分析可知，EcoRI可以識別GAATCC序列，且可以在G和A之間切割；為防止目的基因自身環(huán)化，通常需用兩種酶進(jìn)行同時(shí)切割目的基因和質(zhì)粒，以形成相同的黏性末端。

（1）DNA分子的一條多核苷酸鏈中，兩個(gè)脫氧核苷酸之間以磷酸基團(tuán)和五碳糖相連，該化學(xué)鍵是磷酸二酯鍵；由題目可知，EcoRⅠ識別的DNA序列只有G和A，故切開的是鳥嘌呤脫氧核苷酸和腺嘌呤脫氧核苷酸之間相連的化學(xué)鍵；

（2）PCR擴(kuò)增目的基因的原理是DNA復(fù)制；若利用PCR技術(shù)增加目的基因的數(shù)量，由圖2可知，DNA復(fù)制只能從5’到3’，因此A、B、C、D四種單鏈DNA片段中應(yīng)選取 B和C作為引物；

（3）為防止目的基因與運(yùn)載體反向連接，在構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時(shí)，需用PstⅠ、EcoRⅠ兩種酶同時(shí)切割目的基因和質(zhì)粒；據(jù)圖分析可知，標(biāo)記基因抗四環(huán)素基因和抗青霉素基因上分別有HindⅢ和PstⅠ的切割位點(diǎn)，故為避免標(biāo)記基因被破壞，不選用限制酶PstⅠ和HindⅢ同時(shí)對質(zhì)粒和目的基因進(jìn)行切割；

（4）目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為轉(zhuǎn)化；要檢測轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因，經(jīng)常采用的檢測方法是DNA分子雜交技術(shù)。