Question

【題目】藥物敏感試驗(yàn)簡(jiǎn)稱藥敏試驗(yàn)，旨在了解病原微生物對(duì)各種抗生素的敏感程度，以指導(dǎo)臨床合理選用抗生素。紙片擴(kuò)散法（Kirby-Bauer test）是藥敏試驗(yàn)一種常用的方法，它將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測(cè)試菌的瓊脂平板上，紙片所含的藥物吸取平板中的水分溶解后便不斷向紙片周圍區(qū)域擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細(xì)菌生長(zhǎng)被抑制，形成透明的抑菌圈。

（平板的制備）

（1）關(guān)于藥敏試驗(yàn)所用的瓊脂平板制備過(guò)程，正確的順序是_______

A. 稱量、溶解、定容、調(diào)pH、倒平板、滅菌

B. 稱量、溶解、調(diào)pH、定容、倒平板、滅菌

C. 稱量、溶解、定容、調(diào)pH、滅菌、倒平板

D. 稱量、溶解、調(diào)pH、定容、滅菌、倒平板

（2）培養(yǎng)基的滅菌條件應(yīng)該設(shè)定為__________

A. 0.05kg/cm2，62℃，15~30min B. 0.05kg/cm2，121℃，15~30min

C. 1.05kg/cm2，62℃，15~30min D. 1.05kg/cm2，121℃，15~30min

（測(cè)試菌接種）

（3）若使用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，在平板制備及測(cè)試菌接種環(huán)節(jié)，無(wú)需使用的工具是________

（抑菌圈觀察）

某研究小組將含有相同濃度抗生素I~IV的四個(gè)紙片分別貼放在生長(zhǎng)有測(cè)試菌的瓊脂平板上，在合適的溫度條件下孵育16h，結(jié)果如圖所示：

（4）MIC是藥敏試驗(yàn)中評(píng)價(jià)抗生素藥效的常用指標(biāo)，其定義為某種抗生素對(duì)測(cè)試菌的最低抑制濃度。根據(jù)上圖的試驗(yàn)結(jié)果可知，對(duì)于該試驗(yàn)所用測(cè)試菌而言，抗生素I的MIC_________（選填“大于”“小于”或“等于”）抗生素III的MIC。

（5）在相關(guān)試驗(yàn)操作均嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范的情況下，在含有抗生素IV的紙片周圍出現(xiàn)了較大的抑菌圈，抑菌圈中存在有若干個(gè)測(cè)試菌的菌落。試對(duì)上述現(xiàn)象的成因作出_____________________

Answer 1

【答案】C D D 大于 抗生素IV 對(duì)于野生型測(cè)試菌具有較強(qiáng)的抑制作用，但測(cè)試菌中已經(jīng)出現(xiàn)能抵抗抗生素IV的抗性突變株

【解析】

1．制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基其基本過(guò)程為計(jì)算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板。
2．純化大腸桿菌（1）原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞，使其長(zhǎng)成單個(gè)的菌落，這個(gè)單個(gè)菌落就是一個(gè)純化的細(xì)菌菌落。（2）微生物常見(jiàn)的接種的方法①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

（1）培養(yǎng)基制備的基本過(guò)程為計(jì)算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板，因此關(guān)于藥敏試驗(yàn)所用的瓊脂平板制備過(guò)程，正確的順序稱量、溶解、定容、調(diào)pH、滅菌、倒平板，C正確。
（2）培養(yǎng)基一般采用高壓蒸汽滅菌，其滅菌條件一般在壓力為100 kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30 min，而100kPa相當(dāng)于1.05kg/cm2，D正確。
（3）ABC、該實(shí)驗(yàn)中，測(cè)試菌接種需要利用涂布平板的方法，因此首先需要利用培養(yǎng)皿倒平板，然后用涂布器涂布平板，而涂布器滅菌時(shí)需要酒精燈燃燒殘余的酒精，ABC正確；
D、平板劃線法需要使用接種環(huán)，該實(shí)驗(yàn)無(wú)需使用，D錯(cuò)誤。
（4）MIC是藥敏試驗(yàn)中評(píng)價(jià)抗生素藥效的常用指標(biāo)，其定義為某種抗生素對(duì)測(cè)試菌的最低抑制濃度。分析圖解可知，抗生素Ⅰ的透明圈明顯小于抗生素Ⅲ，因此對(duì)于該試驗(yàn)所用測(cè)試菌而言，抗生素I的MIC大于抗生素III的MIC。
（5）在相關(guān)試驗(yàn)操作均嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范的情況下，在含有抗生素IV的紙片周圍出現(xiàn)了較大的抑菌圈，抑菌圈中存在有若干個(gè)測(cè)試菌的菌落。這種現(xiàn)象可能是由于抗生素IV 對(duì)于野生型測(cè)試菌具有較強(qiáng)的抑制作用，但測(cè)試菌中已經(jīng)出現(xiàn)能抵抗抗生素IV 的抗性突變株。