Question

【題目】人類是乙型肝炎病毒的唯一宿主，現(xiàn)有的肝硬化、肝癌多從乙肝發(fā)展而來(lái)，接種乙肝疫苗是預(yù)防乙肝病毒感染的最有效方法。乙型肝炎疫苗的研制先后經(jīng)歷了血源性疫苗和基因工程疫苗階段。乙肝基因工程疫苗的生產(chǎn)和使用過程如下：

（1）從圖可知，該目的基因的具體功能是______。

（2）若要迅速獲取大量的目的基因，以提高重組質(zhì)粒生產(chǎn)的效率，常用的技術(shù)是（寫全稱）______。過程②常需要 處理大腸桿菌細(xì)胞，促使轉(zhuǎn)化完成。

（3）要形成有效的重組質(zhì)粒，選擇適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶很重要，圖1示意大腸桿菌質(zhì)粒的相關(guān)基因與限制酶切點(diǎn)；圖2示意有關(guān)限制酶在DNA分子中的具體切點(diǎn)。

①要成功轉(zhuǎn)入目的基因，有兩種選擇限制酶的方案，它們分別是______或______。

②下圖是篩選、獲取含有目的基因大腸桿菌的基本過程：B、C培養(yǎng)基中除基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還應(yīng)分別加入的抗生素 、 ，在B、C兩個(gè)培養(yǎng)基中含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌形成的菌落共有 個(gè)。

Answer 1

【答案】（1）指導(dǎo)乙肝病毒蛋白質(zhì)外殼的合成

（2）PCR Ca2+

（3）①只用BamH Ⅰ 同時(shí)用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ

②卡那霉素和四環(huán)素 卡那霉素 兩

【解析】（1）根據(jù)圖中④目的基因最終產(chǎn)生乙肝病毒外殼進(jìn)行接種，說(shuō)明該目的基因具體功能是指導(dǎo)合成乙肝病毒蛋白。

（2）本題較為簡(jiǎn)單但學(xué)生卻容易忽略而出錯(cuò)，記不清楚PCR全稱為多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；過程②常需要Ca2+處理大腸桿菌細(xì)胞，促使轉(zhuǎn)化完成。

（3）①只用BamH Ⅰ切割，在獲取目的基因和切割質(zhì)粒時(shí)使目的基因和質(zhì)粒兩端產(chǎn)生相同的黏性末端，而在連接酶作用會(huì)出現(xiàn)自身環(huán)化、目的基因自身與自身連接、質(zhì)粒自身與自身連接、目的基因與質(zhì)粒連接多種情況，需要篩選；同時(shí)用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ切割，質(zhì)粒和目的基因兩端不會(huì)形成相同黏性末端，在連接酶作用下不會(huì)發(fā)生環(huán)化還可以防止反向連接，最終在連接酶作用下只會(huì)出現(xiàn)目的基因與質(zhì)粒成功重組和沒有進(jìn)行重組的質(zhì)粒．

②本題考查在獲得重組質(zhì)粒時(shí)不會(huì)切割四環(huán)素抗性基因，由圖二知BamHⅠ可切割破壞四環(huán)素抗性基因，所以出現(xiàn)能保持四環(huán)素抗性基因完整的應(yīng)該是用HindⅢ和EcoRⅠ進(jìn)行切割質(zhì)粒，所以最終會(huì)出現(xiàn)成功重組的質(zhì)粒和沒有進(jìn)行重組的質(zhì)粒保持四環(huán)素抗性基因完整，為2種．。 本題主要考察篩選含目的基因受體細(xì)胞方法，依據(jù)原理是根據(jù)重組質(zhì)粒上的抗性基因做抗性接種試驗(yàn)，觀察受體細(xì)胞是否能夠存活，存活的則含有重組質(zhì)粒，即含有目的基因，因此可以在培養(yǎng)基中加入卡那霉素和四環(huán)素。