Question

【題目】下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線。tetR表示四環(huán)素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamHI、HindⅢ、SmaI直線所示為三種限制酶的酶切位點。據圖回答：

（1）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用_________________限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含____________________的培養(yǎng)基上進行。

（2）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列是____________。

（3）過程①可采用的操作方法是______________。

（4）為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用___________技術。

Answer 1

【答案】Hind Ⅲ、BamH I 氨芐青霉素 啟動子 顯微注射 抗原-抗體雜交

【解析】

1、分析題圖：圖中質粒包括四環(huán)素抗性基因、氨芐青霉素抗性基因、啟動子、復制原點，以及兩個限制酶切點，并且兩個限制酶切點的位置均在四環(huán)素抗性基因上；目的基因上有三個限制酶切點，與質粒對照，共有的是BamHI、HindIII。

2、圖中①表示目的基因導入受體細胞，②表示通過胚胎移植的方式將早期胚胎移植到代孕母牛體內。

（1）由圖中信息可知，載體上有HindⅢ和BamHⅠ酶切位點，目的基因上也有它們的酶切位點，應用此2種酶切。當人乳鐵蛋白基因和質粒連接成重組質粒后，tetR基因被人乳鐵蛋白基因隔開，不是完整的，而ampR基因是完整的，所以篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行。

（2）能讓目的基因開始表達的是啟動子，啟動子是RNA聚合酶特異性識別和結合的DNA序列，是基因的一個組成部分，控制基因表達（轉錄）的起始時間和表達的程度。

（3）將目的基因導入到動物受精卵中常用顯微注射法。

（4）一般檢測目的基因是否表達里用抗原-抗體雜交的方法。