Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉運肽基因相連，導入油菜細胞并獲得了轉基因油菜品種。請回答問題：

（1）研究人員依據基因的已知序列設計引物，采用PCR技術從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因中獲取轉運肽基因，所含限制酶(ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ)的酶切位點如圖甲所示。

若用_______和_______酶處理酶D基因和轉運肽基因后，可得到____端與________端(填圖中字母)相連的重組基因。

（2）將上述重組基因進一步處理，插入圖乙所示Ti質粒的T-DNA中，構建____________并導入農桿菌中。將獲得的農桿菌接種在含________的固體平板上培養(yǎng)得到含重組基因的單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉化的侵染液。

（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是_________，進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞，該細胞通過_______技術，可培育成轉基因油菜植株。

Answer 1

【答案】 ClaⅠ DNA連接 A D 基因表達載體(或“重組質�！�) 四環(huán)素 利用農桿菌將重組基因導入油菜細胞 植物組織培養(yǎng)

【解析】試題分析：本題考查基因工程、細胞工程，考查對基因工程工具、操作程序的理解和記憶。解答此題，可根據酶D基因和轉運肽基因所含限制酶的酶切位點選擇限制酶以產生相同的粘性末端，根據Ti質粒上的標記基因篩選含重組基因的農桿菌菌落。

（1）據圖甲可知，酶D基因的A端和轉運肽基因的D端有共同的限制酶ClaⅠ的切點，用ClaⅠ和DNA連接酶處理酶D基因和轉運肽基因，可得到A端與D端相連的重組基因。

（2）將重組基因插入圖乙所示Ti質粒的T-DNA中，即可得到基因表達載體（重組質粒）。Ti質粒中的四環(huán)素抗性基因可作為標記基因，將獲得的農桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)，可得到含重組基因的單菌落。

（3）剪取油菜的葉片放入含有農桿菌的侵染液中一段時間，利用農桿菌能感染雙子葉植物細胞的特性，將重組基因導入油菜細胞。根據細胞的全能性，轉基因油菜細胞可通過植物組織培養(yǎng)技術，培育成轉基因油菜植株。