Question

【題目】SARS冠狀病毒（SARS-CoV）的N蛋白是一種重要的結(jié)構(gòu)蛋白，位于病毒顆粒的核心部分，并與病毒RNA結(jié)合。在病毒的包裝等過程中起重要作用。因此制備抗SARS-CoVN蛋白的單克隆抗體（mAb），對于診斷和治療疾病具有重要意義。用SARS-CoV制備單克隆抗體的流程如下圖：

（1）為了獲得大量的SARS冠狀病毒N蛋白目的基因，可以采用PCR技術(shù)在體外擴(kuò)增，該技術(shù)還需要dNTP、_______酶以及引物等，擴(kuò)增三輪需要的引物數(shù)量為___________個。

（2）若雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，且在高于等電點(diǎn)的pH溶液中帶負(fù)電荷。利用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分離和純化DNA分子主要依據(jù)_______不同，采用外加電場使其分開。在電泳槽中還需要加入______作為參照物進(jìn)行鑒定。

（3）小鼠被抗原蛋白免疫后，可以從___________中獲取細(xì)胞Ⅰ。細(xì)胞Ⅰ中可能包含多種能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞，原因是______________________。

（4）為了分離出只能產(chǎn)生mAb的細(xì)胞Ⅱ，需要用___________技術(shù)對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選。目前可將圖中的___________作為疫苗，預(yù)防SARS冠狀病毒引發(fā)的疾病。

Answer 1

【答案】Taq（耐高溫DNA聚合） 14 分子量（大小） 標(biāo)準(zhǔn)DNA 脾臟 小鼠曾經(jīng)接觸過其他抗原 抗體檢測（抗原—抗體雜交） SARS冠狀病毒的N蛋白

【解析】

由圖可知，提取相關(guān)mRNA，通過逆轉(zhuǎn)錄過程可形成SARS冠狀病毒（SARS-CoV）的N蛋白的目的基因，將該目的基因構(gòu)建基因表達(dá)載體后導(dǎo)入人胚肺成纖維細(xì)胞，在該細(xì)胞中生產(chǎn)SARS冠狀病毒（SARS-CoV）的N蛋白。將此蛋白注射到小鼠體內(nèi)，可引起小鼠發(fā)生特異性免疫，產(chǎn)生能夠分泌與SARS冠狀病毒（SARS-CoV）的N蛋白結(jié)合的抗體的漿細(xì)胞，將此漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)過培養(yǎng)和篩選可獲得能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞，在體外培養(yǎng)該細(xì)胞，即可得到單克隆抗體（mAb）。

（1）PCR過程需要耐高溫的DNA聚合酶，即Taq酶，第一次循環(huán)要1對引物，第二次要2對，第三次需要4對，擴(kuò)增三輪總共需要7對也就是14個引物。

（2）由于雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，且在高于等電點(diǎn)的pH溶液中帶負(fù)電荷。所以利用瓊脂糖凝膠電泳分離純化DNA主要是依據(jù)不同DNA的分子量不同，在電泳槽中還需要加入標(biāo)準(zhǔn)DNA作為參照物。

（3）小鼠被抗原蛋白免疫后，從產(chǎn)生免疫反應(yīng)的小鼠的脾臟中獲取B淋巴細(xì)胞也就是細(xì)胞I。因?yàn)樾∈笤��?jīng)接觸過其他抗原，所以細(xì)胞I可能包含多種能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞。

（4）為了分離出只能產(chǎn)生mAb的細(xì)胞II，可用抗原抗體雜交技術(shù)對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選，目前可以將圖中的SARS冠狀病毒的N蛋白作為疫苗，預(yù)防SARS冠狀病毒引發(fā)的疾病。