Question

【題目】牛雄性胚胎中存在特異性H-Y抗原，可在牛早期胚胎培養(yǎng)液中添加H-Y單克隆抗體，篩選胚胎進行移植，以利用乳腺生物反應器進行生物制藥。請回答下列問題：

（1）為了大量制備H-Y抗體，可以將H-Y抗原基因導入到大腸桿菌或酵母菌進行表達。與大腸桿菌相比，選擇酵母菌獲取H-Y的優(yōu)勢是____________。

（2）下圖的三個DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三種限制酶的識別序列與切割位點。經BamH I酶切后得到的目的基因可以與載體（不含BamH I識別序列）被________酶切后的產物連接，理由是_________________。

（3）可選擇_____期的胚胎，切下少量______細胞進行性別鑒定。待檢驗的細胞通常需要擴大化培養(yǎng)，當培養(yǎng)液中細胞數量不再增加時，若要使細胞繼續(xù)增殖，可采用的方法是進行________。

（4）利用H-Y抗體檢測性別的原理是__________________。還可用SRY-PCR的方法鑒定性別，在PCR過程中若1個DNA分子擴增了4次，則消耗引物_____個。

Answer 1

【答案】酵母菌是真核生物，具有生物膜系統(tǒng)，能對H-Y抗原基因合成的多肽進行高效加工 Sau3AⅠ 兩種酶切割后產生的片段具有相同的黏性末端 囊胚 滋養(yǎng)層 傳代培養(yǎng) 抗原抗體特異性結合 30

【解析】

1、基因工程的工具：限制酶和DNA連接酶、運載體。
2、進行胚胎分割時，應選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚，對囊胚階段的胚胎進行分割時要注意將內細胞團均等分割，否則會影響分割后胚胎的恢復和進一步發(fā)育。
3、SRY-PCR法，操作的基本程序是：從被測的囊胚中取出幾個滋養(yǎng)層細胞，提取DNA；然后用位于Y染色體上的性別決定基因（即SRY基因）的一段堿基作引物，以滋養(yǎng)層細胞的DNA為模板進行PCR擴增；與SRY特異性探針出現陽性反應者，說明其含有Y染色體，為男性。PCR技術依據的原理是DNA復制，每次循環(huán)需要經過變性、復性和延伸三步，所用的引物是一段設計的單鏈DNA或RNA。

（1）酵母菌與大腸桿菌相比，酵母菌屬于真核生物，具有生物膜系統(tǒng)，能對H-Y抗原基因合成的多肽進行高效加工，使之具有生物活性。

（2）識圖分析可知，限制酶BamH I與限制酶Sau3A I切割后形成的粘性末端能夠互補配對，因此經BamH I酶切后得到的目的基因可以與載體（不含BamH I識別序列）被Sau3A I酶切后的產物通過DNA連接酶連接。

（3）根據以上分析可知，可以選擇囊胚時期的滋養(yǎng)層的細胞進行性別鑒定。動物細胞培養(yǎng)過程中存在貼壁生長和接觸抑制的現象，因此當培養(yǎng)液中細胞數量不再增加時，若要使細胞繼續(xù)增殖，可采用分到多個培養(yǎng)瓶中進行傳代培養(yǎng)的方法。

（4）由于抗體和抗原可以發(fā)生特異性結合的原理，利用H-Y抗體進行性別檢測，還可用SRY-PCR的方法鑒定性別，在PCR過程中若1個DNA分子擴增了4次，根據pcr擴增的過程可知，則消耗引物：2+4+8+16=30個。