Question

【題目】【生物——選修3：現(xiàn)代生物科技專題】奶酪生產(chǎn)中的凝乳酶是一種分泌蛋白。研究人員利用PCR技術擴增了目的基因，并培育了能合成凝乳酶的轉基因酵母菌。請結合下圖回答：

（1）利用PCR技術擴增目的基因原理與細胞內(nèi)DNA復制類似（如左圖所示）。圖中引物為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎。從理論上推測，第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占的比例為________。PCR反應體系的主要成分應包含：擴增緩沖液（含ATP和Mg2+)、水、4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、引物和___________。

（2）為了食品安全，右圖所示的表達載體需用___________酶切除抗性基因的部分片段，再用___________酶使表達載體重新連接起來。選用缺失URA3基因的酵母菌作為受體細胞（必須在含有尿嘧啶的培養(yǎng)基中才能存活），為了篩選出成功導入表達載體的酵母菌，所使用的培養(yǎng)基___________（填“需要”或“不需要”）添加尿嘧啶。

（3）工業(yè)生產(chǎn)過程中，選用大腸桿菌作為受體細胞不能正常表達出凝乳酶，而選用酵母菌則能，原因是酵母菌含有______________________。

（4）測定凝乳酶基因轉錄的mRNA序列，測得從起始密碼子到終止密碼子之間的序列為1201個堿基，經(jīng)判斷這段序列的測定是錯誤的，為什么？_______________________。

Answer 1

【答案】 15/16 TaqDNA聚合酶 ApaLI DNA連接 不需要 內(nèi)質網(wǎng)和高爾基體（可對蛋白質進行加工和修飾） 因為生物決定每個氨基酸的堿基序列為三聯(lián)密碼，所以基因轉錄的mRNA序列應為3的整數(shù)倍

【解析】試題分析：由于缺失URA3基因的酵母菌必須在含有尿嘧啶的培養(yǎng)基中才能存活。重組質粒中含有URA3基因。為了篩選出成功導入表達載體的酵母菌，即所使用的培養(yǎng)基不需要添加尿嘧啶，如果能存活，說明導入成功；如不能存活，說明沒有成功.

（1）由圖1可知，由原來的每條母鏈為模板合成的兩個新DNA分子中，只含有引物A或引物B，而以新合成的子鏈為模板合成新DNA分子時，兩種引物都含有，故第四輪循環(huán)共產(chǎn)生16個DNA分子，其中含有引物A的分子是15個，占15/16。PCR擴增技術反應體系的主要成分應包含：擴增緩沖液（含ATP和Mg2+）、水、4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、引物和TaqDNA聚合酶。

（2）根據(jù)圖2顯示ApaL I酶切除位點在氨芐青霉素抗性基因中，因此可以采用ApaL I酶切除抗性基因的部分片段，再用DNA連接酶使表達載體重新連接起來。由于缺失URA3基因的酵母菌必須在含有尿嘧啶的培養(yǎng)基中才能存活。重組質粒中含有URA3基因。為了篩選出成功導入表達載體的酵母菌，即所使用的培養(yǎng)基不需要添加尿嘧啶，如果能存活，說明導入成功；如不能存活，說明沒有成功。

（3）大腸桿菌是原核生物，只有一種核糖體。酵母菌為真核生物，含有內(nèi)質網(wǎng)和高爾基體，可對蛋白質進行加工和修飾，因此可以能正常表達出凝乳酶。

（4）因為生物決定每個氨基酸的堿基序列為三聯(lián)密碼，所以基因轉錄的mRNA序列應為3的整數(shù)倍。從起始密碼子到終止密碼子之間的序列為1201個堿基，不是3倍數(shù)，因此可以判斷這段序列的測定是錯誤。