Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉(zhuǎn)運肽基因相連，導(dǎo)入油菜細(xì)胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種．
（1）研究人員依據(jù)基因的已知序列設(shè)計引物，采用法從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉(zhuǎn)運肽基因，所含三種限制酶（ClaI，SacI，XbaI）的切點如圖所示．則用和酶處理兩個基因后，可得到端與端（填圖中字母）相連的融合基因．

（2）將上述融合基因插入圖所示Ti質(zhì)粒的T﹣DNA中，構(gòu)建并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含的固體平板上培養(yǎng)得到含融合基因的單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的侵染液．
（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是 ， 進一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞，該細(xì)胞通過技術(shù)，可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株．
（4）用法可檢測轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達．

Answer 1

【答案】
（1）PCR；ClaⅠ；DNA連接；A；D
（2）基因表達載體（或“重組質(zhì)�！保�；四環(huán)素
（3）利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞；植物組織培養(yǎng)
（4）抗原﹣抗體雜交
【解析】解：（1）研究人員依據(jù)基因的已知序列設(shè)計引物，采用PCR法從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉(zhuǎn)運肽基因．在上述引物設(shè)計時，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到A、D端相連的融合基因．（2）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T﹣DNA中，構(gòu)建表達載體即重組質(zhì)粒并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液．（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞，進一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞．該細(xì)胞通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株．（4）用抗原﹣抗體雜交法可檢測轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達．
所以答案是：（1）PCR ClaⅠ DNA連接 A D（2）基因表達載體（或“重組質(zhì)�！保� 四環(huán)素（3）利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞 植物組織培養(yǎng)（4）抗原﹣抗體雜交
【考點精析】通過靈活運用基因工程的原理及技術(shù)和植物培養(yǎng)的條件及過程，掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)；植物組織培養(yǎng)就是在無菌和人工控制條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株即可以解答此題．