Question

【題目】【生物——選修1：生物技術實踐】

下圖為銀川環(huán)保部門對艾依河段的大腸桿菌進行檢測的操作和配方圖。據(jù)圖回答下列相關問題：

（1）圖甲中濾膜的孔徑應__________（填“大于”或“小于”）大腸桿菌。

（2）配制圖乙中的基礎培養(yǎng)基時，除了水分、無機鹽和瓊脂以外，還應加入__________。待各成分都熔化后,調整pH和滅菌，待冷卻至50℃左右時，在酒精燈火焰附近___________。大腸桿菌在伊紅美藍培養(yǎng)基上生長呈黑色菌落，從功能上劃分，該培養(yǎng)基屬于_________培養(yǎng)基。

（3）用平板劃線法分離樣液中的大腸桿菌，操作時，接種環(huán)通過灼燒滅菌，在第二次及以后劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線的目的是_________。

（4）要檢測樣液中的大腸桿菌含量，取1ml河水樣本，加入4ml無菌水，充分混勻后，在3個平板上用涂布平板法分別接入0.1ml樣液，在37℃的培養(yǎng)箱中放置48小時，3個平板上的黑色菌落數(shù)分別為51、50、49。據(jù)此可得出1ml河水樣本中活菌數(shù)為______個。

（5）該小組通過統(tǒng)計菌落的數(shù)目，計算出單位體積樣品中大腸桿菌數(shù)目，理論上他們的統(tǒng)計值比實際值_______（偏高/偏低），理由是_______________。

Answer 1

【答案】 小于 氮源（蛋白胨） 倒平板 鑒別（鑒定） 將聚集的菌體逐步稀釋，以便獲得單個菌落 2.5×103（或2500） 偏低 兩個或多個大腸桿菌連在一起時，平板上只能觀察到1個菌落

【解析】【試題分析】

1．對不耐高溫的試劑，可以用濾膜過濾除菌。圖甲中為了在濾膜上獲得大腸桿菌，濾膜的孔徑應小于大腸桿菌。

2．作為基礎培養(yǎng)基，其營養(yǎng)成分應能滿足微生物生長的需要，都應含有水、無機鹽、碳源（提供碳元素的物質）和氮源（提供氮元素的物質）等。

3.鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品配制而成的，用以鑒別不同種類的微生物。例如，在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍，可以用來鑒別大腸桿菌等細菌。

4.每mL樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V) ×M，其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。

（1）圖甲中濾膜的孔徑應小于大腸桿菌，濾膜過濾才能獲得大腸桿菌。

（2）培養(yǎng)基應該滿足微生物生長需要，因此配制圖乙中的基礎培養(yǎng)基時除了水分、無機鹽和瓊脂以外，還應加入氮源；待各成分都熔化后,調整pH和滅菌，待冷卻至50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板；大腸桿菌在伊紅美藍培養(yǎng)基上生長呈黑色菌落，從功能上劃分，該培養(yǎng)基屬于鑒別（鑒定）培養(yǎng)基。

（3）用平板劃線法分離樣液中的大腸桿菌的操作中，為了將聚集的菌體逐步稀釋，以便獲得單個菌落，需要在第二次及以后劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。

（4）根據(jù)題意可知，涂布平板時所用的稀釋液的稀釋倍數(shù)M＝5，3個平板上的黑色菌落平均數(shù)C＝(51＋50＋49) ÷3＝50，涂布平板時所用的稀釋液的體積V＝0.1mL。根據(jù)公式可知，1ml河水樣本中活菌數(shù)＝(C÷V)×M＝(50÷0.1)×5＝2.5×103（或2500）個。

（5）若兩個或多個大腸桿菌連在一起時，平板上只能觀察到1個菌落，因此理論上該小組的統(tǒng)計值比實際值偏低。