Question

【題目】Ⅰ.某實驗小組欲從豆油污染的土壤中篩選出能高效降解脂肪的菌株。請回答：

（1）在篩選過程中，應將土壤樣品稀釋液接種于以______為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于______培養(yǎng)基。

（2）為避免培養(yǎng)皿污染，需將培養(yǎng)皿呈______狀態(tài)放置。為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過高，需將培養(yǎng)液進行______處理。

（3）為了排除______，需設置接種______的培養(yǎng)基作為空白對照。

（4）為了篩選出菌株，可將適量的______試劑滴加在平板中的菌落周圍，洗去浮色后，如果菌落周圍的現象是______，則說明此種菌能夠分泌脂肪酶。

（5）純化菌種時，為了得到單菌落，可采用______法接種于新的平板上，然后用接種環(huán)挑取單菌落至空白斜面，最后置于______中保存。

Ⅱ.天津獨流老醋歷史悠久、獨具風味，其生產工藝流程如下圖。

(1)在糖化階段添加酶制劑需要控制反應溫度，這是因為酶_____________________。

(2)在酒精發(fā)酵階段，需添加酵母菌。在操作過程中，發(fā)酵罐先通氣，后密閉。通氣能提高________的數量，有利于密閉時獲得更多的酒精產物。

(3)在醋酸發(fā)酵階段，獨流老醋采用獨特的分層固體發(fā)酵法，發(fā)酵30天。工藝如下：

①發(fā)酵過程中，定期取樣測定醋酸桿菌密度變化，趨勢如圖。據圖分析，與顛倒前相比，B層醋酸桿菌在顛倒后密度變化的特點是____________________，由此推測，影響醋酸桿菌密度變化的主要環(huán)境因素是____________________（不止一個）。

②乳酸含量高是獨流老醋風味獨特的重要成因。發(fā)酵過程中，發(fā)酵缸中_______________層的醋醅有利于乳酸菌繁殖，積累乳酸。

③成熟醋醅中乳酸菌的種類明顯減少，主要原因是發(fā)酵后期營養(yǎng)物質消耗等環(huán)境因素的改變，加劇了不同種類乳酸菌的__________，淘汰了部分乳酸菌種類。

Answer 1

【答案】 豆油 選擇 倒置 稀釋 過程中的雜菌干擾 等量無菌水 蘇丹Ⅲ 透明圈 劃線分離（涂布分離） 冰箱 在最適溫度條件下催化能力最強 酵母菌 先快速增長后趨于穩(wěn)定 氧氣、營養(yǎng)物質、pH 顛倒前的B層和顛倒后的A（或不翻動，或下） 種間競爭（或競爭）

【解析】試題分析：培養(yǎng)基的營養(yǎng)構成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽；常用滅菌方法：灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法；接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。參與果酒制作的微生物是酵母菌，其新陳代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧型；參與果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型。果醋制作的原理：當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的果糖分解成醋酸；當缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰�，再將乙醛變�(yōu)榇姿帷?/span>

Ⅰ.（1）欲篩選出能降解豆油的菌株，培養(yǎng)基中應只含有豆油而無其它碳源，不能降解豆油的細菌在此培養(yǎng)基上不能生存，從功能上講，這類培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。

（2）為避免培養(yǎng)皿污染，需將培養(yǎng)皿呈倒置狀態(tài)放置；為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過高，需將培養(yǎng)液進行梯度稀釋處理。

（3）為了排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，需設置接種等量無菌水的培養(yǎng)基作為空白對照。

（3）由于脂肪遇蘇丹Ⅲ或者蘇丹Ⅳ試劑會出現橘黃色或者紅色，所以為了篩選出菌株，可將適量的蘇丹Ⅳ試劑滴加在平板中的菌落周圍，洗去浮色后，如果菌落周圍的現象是出現透明圈、不出現橘黃色或紅色圈，則說明此種菌能夠分泌脂肪酶。

（4）分離純化菌種時，需采用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，使聚集在一起的細菌細胞分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落，以便純化菌種。純化后的菌種應該置于冰箱中保存。

Ⅱ.（1）分析流程圖可知，糖化階段就是淀粉在淀粉酶以及麥芽糖酶的作用下水解產生葡萄糖，由于在最適溫度條件下酶的活性最強，因此在糖化階段添加酶制劑需要控制反應溫度。

（2）酵母菌屬于兼性厭氧型微生物，即在有氧呼吸的條件下能夠大量繁殖，在無氧呼吸條件下無氧呼吸產生酒精。因此在酒精發(fā)酵階段，發(fā)酵罐先通氣，后密閉；通氣的目的是提高酵母菌的數量，有利于密閉時獲得更多的酒精產物。

（3）①醋酸菌屬于需氧型細菌，只有在氧氣充足的時候能夠大量繁殖并能產生醋酸。據圖3分析，與顛倒前相比，B層醋酸桿菌密度先快速增長后趨于穩(wěn)定，變化的主要環(huán)境因素是氧氣、營養(yǎng)物質、PH。

②乳酸含量高是獨流老醋風味獨特的重要成因，酸發(fā)酵是乳酸菌進行的無氧呼吸，因此發(fā)酵過程中，發(fā)酵缸中顛倒前的B層和顛倒后的A（或不翻動，或下）層醋醅有利于乳酸菌繁殖，積累乳酸。

③成熟醋醅中乳酸菌的種類明顯減少，主要原因是發(fā)酵后期營養(yǎng)物質消耗等環(huán)境因素的變化，加劇了不同種類乳酸菌的種間競爭（或競爭），淘汰了部分乳酸菌種類。